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Ec-cLYZ①③肠②⑤重组质粒2制酶Sacl酶重组质粒1切TCGAGGG-5纯型AACTG3493bp限酶识别序列3'CTTTGAGIAATTOSallGITCGACSaclGAGCTICEc-cLYZ片段（533bp)MEL片段(78p5'-GGTATTGGTGGTATCATCATCATTAA-3'5'-ACTGGGGACATT----GCTTGCAGCATCAA-3'3'-CCATAACCACCATAGTAGTAG TAATT-5'3'-TGACCCCT GTAA--CGAACGTCGTAGTT-5'注：重组质粒1是人工合成的包含MEL和Ec-cLYZ融合基因(1)斜带石斑鱼c型溶菌酶属于免疫系统的相对于原核表达系统，毕赤酵母表达系统翻译出的蛋白可以经过加工修饰，表达的蛋白具有天然生物学活性。(2)为获得MEL和EC-cLYZ融合基因，同时两端带有pPICZ aA的同源序列，过程①PCR反应体系中加入的模板是，引物应该选择以下(2分)。A.5'-GAAACTGAAGCTCCCGAATTCGGTATTGGTGGT-3B.5'-CATCATCATCATCCCCGICGACTTGATGCTGCAAGC-3'C.5'-GGGGATGATGATGATGGAATTCTTGATGCTGCAAGC-3'D.5'-GGGAGCTTCAGTTTCGICGACGGTATTGGTGGT-3(3)过程②将PCR产物片段与线性化的pPICZaA混合后，在重组酶的作用下可形成环化质粒，这一过程与传统构建重组质粒相比不需要酶。(4)为了验证构建是否成功，利用限制性内切酶EcoRI和SaI对提取出的重组质粒2进行双酶切，利用琼脂糖凝胶电泳检测，结果显示分别得到大小约为(2分，限制酶识别序列不计)的片段。过程③将重组质粒2导入大肠杆菌的目的是(5)过程⑤培养毕赤酵母时加入作为唯一碳源，目的是(6)目的基因与宿主基因组染色体的交换方式包括单交换和双交换。含有目的基因的载体插入宿主染色体的AOX1基因的上游或下游，不影响AOX1基因的正常表达，属于单交换；当发生基因取代时，含目的基因的载体与宿主染色体中AOX1基因区域发生交换，宿主AOX1基因编码区域被全部取代，属于双交换。以AOX1基因两端序列为依据设计引物，对三株重组酵母（编号1、2、3）进行菌液PC、电泳后得到右图，根据结果推断目的基因与宿主基因组染色体发生单交换的酵母菌株有(2分).M20001000750500250100
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